●后被纽法遇到一定阶段，卵巢中的卵泡渐趋成熟，卵泡壁细胞分泌雌性激素并进入血液使母牛的行为和生理产生重大变化，称之为发情。每头母牛第一次发情出现的时间，因品种、营养状况和气候等多种因素而有差别。上海荷斯坦品种牛的首次发情，一般出现在8-12月龄之间，最早的为6月龄。
●观察到第一次发情时，应该是建立该牛繁殖档案的起始日。
●至14月龄仍无初情征候的，应及时作检查，判断原因并采取措施。
2发情周期
奶牛出现初情期后，除妊娠及分娩后28天内之外，正常母牛均会周期性的出现发情。从一次发情开始到下一次发情开始之间的时间，称之为一个发情周期。荷斯坦牛的发情周期平均为21天。但每一个牧场会因客观条件的不同而有差别。如上海某一大型牧场的统计数为22天。每个授精员都应掌握所管理牛群的发情周期天数和个体牛的发情规律。做到心中有数，按计划实施牛群的繁殖。
3 发情征候
3.1 行为变化
●敏感躁动，有人或其他牛靠近时，回首眸视；
●寻找其他发情母牛，活动量、步行数大于常牛5倍以上；
●嗅闻其他母牛外阴，下巴依托它牛臀部并摩擦；
●压捏腰背部下陷，尾根高抬；
●有的食欲减退和产奶量下降；
●爬跨它牛或“静立”接受它牛爬跨，后者是重要的发情鉴定征候。
3.2 身体变化
●外阴潮湿，阴道粘膜红润，阴户肿胀。
●外阴有透明、线装粘液流出，或粘污于外阴周围，粘液有强的拉丝性。臀部、尾根有接受爬跨造成的小伤痕或秃毛斑；
●有时体表潮湿，有蒸腾状；
●60%左右的发情母牛可见阴道出血，这大约在发情后二天出现。这个征候可帮助确定漏配的发情牛，为跟踪下次发情日期或为应用前列腺素调整发情日期提供可靠依据。
4 观察发情
●大多数的母牛发情持续期为10-24小时（18±12小时）；
●母牛表现发青的时间分布为：
18﹕00-24﹕00 25% 6﹕00-12﹕00 22%
0﹕00-6﹕00 43% 12﹕00-18﹕00 10%
●多次观察能增加检出率（见下表）：
观察次数
观察时间
检出率%
2222
6﹕00 18﹕008﹕00 16﹕008﹕00 18﹕008﹕00 20﹕00
69545865
33
8﹕00 14﹕00 20﹕008﹕00 14﹕00 20﹕00
7373
444
8﹕00 12﹕00 16﹕00 22﹕006﹕00 12﹕00 16﹕00 20﹕008﹕00 12﹕00 16﹕00 20﹕00
808675
5
6﹕00 10﹕00 14﹕00 18﹕00 22﹕00
91
●裸视观察发情是目前最使用的方法。
●对异常发情、产后50天内未见发情的牛只，应及时检查和采取措施，使其恢复正常发情。对产后40天-50天的母牛实施生殖系统普查，尽早克服繁殖系统隐患，是一种值得推荐的方法。
●依照上次发情纪录，推算本次发情日期或用电脑提示，对提高观察发情效率是有益的。
5 适时配种
●静立、接受爬跨和阴户流出透明量多且具有强拉丝性粘液（粘丝提拉可达6-8次，二指水平拉丝后，粘丝可呈“Y”状），是配种最适宜的时段。
●发情征候与最佳配种时段的关系示意表如下：
躁动期
静立强拉丝期
回复期
爬跨
爬跨它牛
静立接受爬跨；爬跨它牛
拒绝它牛爬垮；爬跨它牛
行为
敏感、鸣叫、躁动多站立与走动、回首眸视、自卫性、尾随。
尾随、添它牛；食欲减退不安。
恢复常态
阴户
略微肿胀
肿胀，阴道壁湿润闪光
肿胀消失
粘液
少而稀薄，弱拉丝性
最多而透明含泡沫，强拉丝性。二指作拉丝可达6-8次，粘丝可呈“Y”状
粘稠呈胶状
持续时间
8±2小时
18小时
12±2小时
配种
最佳配种期
●整个发情期的征候变化是一个渐进性的过程。发情的持续期，具有个体差异性。
●由于实践操作一天二回的观察发青，因此很少能观察到发情的起始点。“开始发情”的时间多数只能依靠估测。“开始发情”后16-24小时可视为最佳配种期。
●通常在早晨发现牛发情的，应在下午输精；在下午发现发情的，应在次日早晨输精。
●观察到静立、强拉丝粘液征候，即予输精，是最佳的机遇。
●通常掌握适时配种，输一次精即可。只有当触摸卵泡诊断延迟排卵时，才有需要进行第二次输精。
6 同期发情
●同期发情技术是人为控制奶牛在某一时段发情的技术，应予以推广。
—同期发情技术的使繁殖计划更有下地实施；
—同期发情技术可以缩短发情周期，弥补漏配牛造成的时间损失；
—同期发情技术使人工授精集约化成为可能，对提高人工授精效率，人工授精服务优化及广大覆盖面有积极意义；
—在胚胎移植中，同期发情技术使供体获得更多的同步受体……
●同期发情技术有宫腔放置节育环法，孕酮-雌激素埋植法和前列腺素注射法等。
●前列腺素已被广泛应用，具有有效、快捷、方便的特点，在上海已有二十余年应用史。
—前列腺素F2a 型及其类似物的作用机理是能使卵巢黄体溶解退化，使卵巢活动进入新的卵泡发育成熟期。PGF2a对平滑肌纤维有轻微的收缩作用。
—理论上在奶牛发情的第6-17天内（实际操作多在11-13天内更为有效）深肌或皮下注射PGF2a可使成熟黄体溶解退化，继而在2-5天内出现卵泡成熟的发情征候。在注射PGF2a 24小时后，可加注乙烯雌酚，以增加发情征候的表达。
—发情周期第1-5天，黄体尚未成熟，第18-21天黄体处于退化期。在此两个阶段内注射PGF2a，将都体现不出溶黄体作用而是徒劳的。
—采用两次注射法，即在第一次注射后的第11-13天内进行第二次猪舍，可使受注牛在第二次注射时都处在黄体期，从而在二次注射后的2-5天内所有能正常发情的牛都进入发情状态而可以实施集约化的人工授精。
●PGF2a对溶解持久黄体同样有效，可治疗持久黄体型不孕症。
●PGF2a对妊娠黄体有溶解作用，因此且忌应用PGF2a于孕牛，除非是临床需要。
三、配种技术
●直肠检查子宫和卵巢（泡）态势及把握子宫颈输精是规范的配种技术。
●发情观察结合直肠检查触摸卵泡成熟状态，是提高受胎率的完美结合。
●在行将排卵及刚刚排卵时输精，使精子先于到达子宫及输卵管内“获能”后与卵子结合，会得到高的受精率。
●子宫炎症会妨碍受精卵的着床和发育。因此，输精前及输精中应保持牛阴户周围的清洁及输精器具的干燥与卫生（输精枪外应使用薄膜防护套）。
●子宫创伤出血对精子与受精卵的存活不利，应尽量避免创伤。可应用对精子无害、对生殖道粘膜无刺激的润滑剂。
●在输精器接近子宫颈外口时，正确的方法应是用把握子宫颈的手拉向阴道方，使之接近输精器前端，而不是用力将输精器推向子宫颈。要凭手指的感觉将输精器导入子宫颈。
●输精器前端在通过子宫颈横行、不规则排列皱褶时的手法是输精的关键技术。可用改变输精器前进方向、回抽、摆动、滚动等操作技巧，是输精器前端通过子宫颈。禁止以输精器硬戳的方法进入。
●直肠把握宫颈的要领是：
—轻柔触摸肛门，使肛门肌松弛。
—手臂进入直肠时，应避免与努责与直肠蠕动相逆方向移动。分次掏出粪便。
—避免空气进入直肠而引起直肠膨胀。
—用手指插入子宫颈的侧面，伸入宫颈之下部，然后用食、中、拇指握抓住宫颈。
—宫颈比较结实，阴道质地松软，供体似海绵体（触摸后为有弹性的实感）。
—输精器以35-45角度向上进入分开的阴们前庭段后，略向前下方进入阴道宫颈段。
—把握宫颈的整个手势要柔和，在输精器进入宫颈前，可将宫颈靠在盆骨边上，并轻轻挤压宫颈周围的阴道壁，使输精器只能进入子宫颈口，而不会误入阴道穹隆。
●精液的注入部位是子宫体与子宫角的结合部。在确定注入部位无误后注入精液。
●在技术熟练的条件下，可将精液注入排卵侧的子宫角大弯部。
●非一次性输精用具，在每头牛输精后应清洗、干燥消毒后备用。
四、精液的质量、贮存和取用
1 精液的质量
精液的质量，除遗传质量外，其受胎率是人工授精关注的重要方面。采购精液时，要选择有良好管理和精液符合国标的种公牛站。每次采购同一头批冻精，应抽样检查其活力、密度、顶体完整率、畸形率和微生物指标是否符合国标。（活力≥0.35，直接运动精子密度≥1000万个，顶体完整率≥40%，畸形精子率≤20%，非病原细菌数≤1000个/ml）
2 贮存
●精液封装于0.25ml的塑料细管中，贮存在高真空保温的液氮罐内。
●液氮罐虽然是结实的金属罐，但仍应避免碰撞而使保湿效果下降。液氮罐应放置在清洁、干燥、通风处的木质垫板上，周围不能有化学品。
●罐内应保持有足够量的液氮存量。罐的液氮水平面，应保持在18cm以上，至16cm时，即应添加液氮，5cn的水平是极限。应以标尺定期检查及水平。可用兰红二色安瓿指示管或固定式磅秤判别液氮水平。
3 精液的取出
●除本次需要取出的冻精外，其他冻精不可提到罐口以下3.5cm线以上。寻找冻精超过10秒钟，应将分装桶放回液氮罐内，然后再提起寻找，以保持冻精的冷度。
●本次需用之冻精，取出后置38℃水浴瞬时解冻，或采纳其他行之有效的解冻方法，然后予以保温并在最短时间内输精完毕。
●每一头公牛的精液，应放置在同一分装桶内，并有分装清单，清单上包括公牛号、数量和取用纪录。以缩短取出时间，保证冻精质量不受升温的伤害。
●为保持液氮罐的清洁，减少污染，在清洗液氮罐时，预备好的清洁液氮罐应并列放置，快速转移，冻精裸漏在罐外的时间不能超过3-5秒钟。
五、验胎
1 验胎有很重要的经济意义。早期诊断出空怀牛只可减少饲料等经济损失。正确的诊断可确定妊娠期，计算预产期和安排干奶期。
2 验胎有直肠检查和激素试验两种方法。通常只用直肠检查，便能快捷、正确地做出判断。
3 直肠检查应注意解剖学位置，循序渐进。
4 直肠检查最早能判断的时间是授精后的第21-24天。触摸到2.5-3cm发育完整的黄体，表明90%以上怀孕了。
5 在授精后60天和第180-210天进行两回验胎，第一回是为确诊有胎，第二回是确保有胎，准备干奶。两回验胎后均应作正式纪录和报告有关岗位。第一回验胎时间，在技术保证前提下，可提早到授精后40-60天进行。
6 验胎时几个主要妊娠指征：
21-24天
≈40天
≈60天
≈90天
≈180天
≈210天
卵巢
2.5-3.0cm直径，发育完整的黄体
子宫
①子宫角不对称②孕角有波动感③宫角直径4-6cm
①孕角直径6-9cm②按压孕角胎液移动，胚胎反弹、可触感
①孕角直径12-16cm②沿宫角可能摸到胚胎及小子叶③子宫下沉进盆腔
宽韧带
子宫中动脉直径0.4-0.6cm
同左
①中动脉直径0.5-0.7cm②有震颤感
①中动脉0.7-0.9cm②搏动感
①中动脉8-1.0cm②流水感
7 激素试验是本次发情后23-24天采集血浆、全乳或乳脂测定孕酮含量（乳中的孕酮含量比血液中高5-6倍）的方法，来判定妊娠与否。激素试验的阴性诊断可靠性为100%，但阳性诊断可靠性只有85%。因为可能发生胚胎早期死亡，发情周期超短（采样时处在黄体期）、黄体囊肿或持久黄体时，均会呈现孕酮阳性反映。
六、繁殖计划
1 初配月龄
●对后备牛好的饲养管理，能充分利用低龄牛的生长优势，不但能使后备母牛较早地达到适当的体格大小，同时还可提高受胎率、顺产率和终身产奶量。
●上海地区15月龄的荷斯坦牛体重达530kg时，即可加入配种队伍。18月龄是投入配种月龄的上限。
2 产犊间隔
传统上把产犊间隔锁定为12-13个月，对于成乳牛生产水平在7000kg或以下的牛可能是适宜的。但随着牛群改良和生产水平的提高，逐渐显示出这个标准的滞后性。而且从细化繁殖管理、以及从对人工授精工作业绩评估的科学化、合理化的角度，均需要对各类不同牛只的产犊间隔做一个调整。对产犊间隔锡化硅定位：
胎次
上胎次305天产量（kg）
胎间距（月）
头胎
本胎次估测≤6500
12
本胎次估测6501-7200
13
本胎次估测7201-7800
13.5
本胎次估测＞7800
14
二胎及以上
≤7000
12
7001-8000
12.5
8001-9000
13
9001-10000
13.5
＞10000
14
3 繁殖的季节性与市场化
●上海各产犊月份的奶产量较正系数：（据984.1-1992.3资料统计）
就305天产奶量而言，10月份分娩的牛，其生产性能可得到最理想的表达。
产犊月份
校正系数
产犊月份
校正系数
产犊月份
校正系数
1
1.0140
5
1.0344
9
0.9893
2
1.0164
6
1.0455
10
0.9730
3
1.0206
7
1.0320
11
0.9764
4
1.0265
8
1.0268
12
1.0000
●就奶牛场自身效益和管理难度而言，避开上海最为炎热的七、八两个月分娩，一可提高305天产量，二可减少产科疾患。
●7-8两个月的奶牛分娩，通常只安排部分适龄青年母牛。但为适应市场对乳及乳制品的需要，4-6月也应有计划地安排多一些的牛只分娩，以提高6-9月的生奶上市量。
6.4 选种选配
●应用良种公牛的冻精作人工授精，使之获得新的优秀基因，提高后裔的生产性能与经济效益，使奶牛技术中周期较长然回报率最高的手段。
●不同系谱的亲本牛相互结合的后裔，有不同程度的效应与回报率，亦有出现负效应的，所以在选择同样优秀种公牛精液时，还必须注意其结合效应，即要注意选种选配，才能得到好效果。
●在选种选配时确定第一优秀公牛（主线公牛）时，还应考虑到受胎率、精液拮抗等因素，需同时选出一头第二优秀公牛（副线公牛）备用。（详见奶牛育种规范及技术要点）
七、繁殖障碍
导致繁殖障碍的因素颇多，在通常饲养水平的牛场中，多见的繁殖障碍主要有两类：一类是子宫内膜炎，另一类是激素失衡。
1 子宫内膜炎
●子宫内膜炎的病因，在繁殖工作实践中，多数子宫内膜炎是由于产犊时或之后处置不当或宫缩乏力导致恶露滞留，细菌大量繁殖而引起。人工授精的各种器械进入生殖道消毒不严的操作，也是引发子宫内膜炎的重要原因。一些传染病，如布氏杆菌、胎儿孤菌病，以及牛传染性鼻气管炎（IBR）、阿卡斑病等病毒性疾病和寄生虫（毛滴虫病）等等，都会直接或继发子宫内膜炎。
●通过观察恶露变化，大致就能判断子宫自净程度，产后恶露的类型、颜色和数量为：
产后天数
恶露类型
颜色
排出量/天
0-3
粘稠带血
清洁透明和红
≥1000ml
3-10
稀、粘带颗粒或绸带凝块
褐红色
500ml
10-12
稀、粘、血
洁明、红或暗红
100ml
12-15
粘稠，呈线状
洁明、橙色
50ml
15-20
稠
清洁透明
≤10ml
●恶露中出现其他性质和颜色的恶臭物质，就表明子宫内膜炎的发生。
●产后十天内出现无恶露或发生乳房炎就必须警惕有否子宫内膜炎的存在。
●子宫净化
—各种子宫内膜炎都会不同程度地影响繁殖之成功，因此净化子宫十分重要。
—净化子宫可用抗菌药物，必要时可全身用药。
—卢戈氏液是净化子宫的一种选择：
△ 价格低廉
△ 使用面广
△ 效果确切
△ 无抗药性
△ 牛乳中无抗菌素的危险
— 卢戈氏液的配方：
碘 1.0
碘化钾 2.0
蒸馏水 300.0或75.0-225.0（浓液）
— 卢戈氏液加等量甘油，能减少对子宫的刺激而减轻弩责度。
—在子宫内使用100ml卢戈氏液后血液中的碘含量在半小时即达到高峰，然后逐步下降，两天后减少二分之一。
—授精后12小时之内及36小时之后，不可用药冲洗子宫，以免破坏可能怀孕的机会。
—卢戈氏液除了杀菌外，还可对坏死粘膜起到刮除作用，浓度高的卢戈氏液，若在发情第5-15天内使用，会使周期缩短，一般在使用后5天发情。这可能是诱导释放前列腺素所至。在使用正常浓度卢戈氏液时，也可配合使用前列腺素制剂，加强排出不净物质。
—卢戈氏液的用量可视宫腔容积大小而定，通常在50-150ml，注入后轻度按摩子宫，使溶液分布均匀。
—0.1-0.2%雷佛奴尔液或0.1%呋喃西林液作子宫净化剂也有好的效果。
2 激素失衡
●奶牛发情周期的各个时段有其各种不同的身体和行为的变化，这种表象为人们掌握并适时配种，实施有计划的奶牛繁殖。这些表象，使一些激素活动过程的表达。
●生殖激素分别由下丘脑（脑的一部分）、垂体（位于脑下的憩室）、卵巢与子宫分泌。
—下丘脑释放促卵泡素释放因子（FRH），促使垂体分泌促卵泡素（FSH）。促卵泡素到达卵巢，促卵泡发育。卵泡分泌雌激素，使母牛进入发情。
—当血液中雌激素含量高时，使下丘脑停止分泌促卵泡素释放因子，转而分泌促黄体素释放因子（LRH），作为下垂体，使垂体释放促黄体素（LH）。
—FRH与LRH统称为GnRH（促性腺释放因子），具有十肽结构。而结构少一个肽的九肽的GnRH类似物，其生物活性要高出许多。
—促卵泡素和促黄体素相对平衡，促使卵泡破裂，在促黄体素刺激下形成黄体，分泌孕酮。
—若不受孕，约在发情后13天黄体达到最大，然后由于子宫分泌溶黄体物质-前列腺素，黄体开始消退。若受孕，胚胎阻止前列腺素的生成与溶黄作用。
—血液中孕酮含量的减少，使下丘脑分泌促卵泡素释放因子，促使垂体释放促卵泡素，新一轮发情开始。
●生殖激素相互和循环的作用，是奶牛的繁殖循序实现。但当生殖激素中的某一种失常、失衡时，就会发生繁殖障碍。
●已经有与生殖激素相同或其类似物在试制或已成为商品。当发生由于激素失衡而导致的繁殖障碍时，可选择相应的药物，按商品说明正确使用。
八、繁殖记录与档案
1、笔记本
奶牛繁殖工作之成败，是由每天几回的临场观察之效果所决定，观察的内容包括牛只发情、过情、异常行为、子宫（阴道）分泌物状况，同时收集配种、验胎、流产等各种信息，把这种信息及时摘记在随身小笔记本上，随后分别输入电脑或档案卡，或安排工作处置之程序，是一种十分简便的良好的习惯，也是人工授精员的工作规范内容之一。
2 、繁殖工作分类册
每天应将比基本内容按发情、配种及繁殖障碍分类等分别造册或输入电脑。
3 、牛只繁殖卡（档案）
●每头奶牛在初情之后，应建立该牛的档案（繁殖卡）。
●繁殖卡内容应包括牛号、所在场、舍别、出生日期、父号、母号、发情期、配种日期与配公牛、验胎结果（予产日期）、复验结果、分娩或流产、早产日期、难/顺产，犊牛号和重大繁殖障碍摘记等。
●繁殖卡，内容应在发生当月固定的日期填清。
4 、月报表
4.1 配种月报表
●每月3日应将上月配种情况汇总列表报告。
●配种月报表应包括下列内容：序号、舍别、牛号、配种日期、与配公牛、配次、耗精数与备注。报表安配种日期顺序编报。
●管理严密的牧场，配种月报表可细化为旬报。
4.2 验胎月报表
●每月3日应将上月验胎及复验情况分别列表。
●验胎月报表应包括序号、舍别、母牛号、与配公牛号、配种日期、验胎日期及结果、预产期。其顺序应与配种月报表相对应。
4.3 不正产月报表
●每月3日应将上月不正产（在胎日≤270天，活犊除外）情况列表报告。
●不正产月报表应包括不正产日期、舍别、母牛号、胎次、配种日期、在胎天数、与配种牛、胎儿、胎衣、原因简析等。其报表顺序按不正产日期填报。
4.4 月报表实行电脑管理，内容不应低于上述各条要求。
4.5 月报表至少应一式两份，由制表人与收表人分别签发（收）并各执一份供使用及备查。
九. 技术统计（详见统计规范）
1 、年情期受胎率
●国际通常以情期受胎率来了解和比较牛群的繁殖水准和技术水准。
●本规范要求年情期受胎率达到50%。
●年情期受胎率的计算公式为：
年受胎母牛总头/ (年发情并配种牛总头次- 配种二个月内出群未孕牛)×100%
●年情期受胎率统计日期按繁殖年度，即上年10月1日至本年9月30日至计算。
2、年一次受胎率（年第一情期受胎率）
●年一次受胎率可反映奶牛场人工授精员掌握配种技术的水平。
●规范要求年一次受胎率达到55%.
●牛一次受胎率的计算公式为：
与分母相应牛头数中的受胎数/第一情期实施配种的牛头数×100%
●已繁殖年度计算。
3 、年总受胎率
●年总受胎率要求，按上个自然年度的生产水平来制定：
生产水平（kg）总受胎率（%）
≤6500 85
6501-7200 83
7201-7800 81
＞7800 79
●计算年总受胎率的公式为：
一年受配母牛数为期初18月龄以上母牛，加期初未满18月龄但参加配种的牛，再加不正产后又配上的牛，减去配后二个月内出群未孕牛。
年受胎母牛头数/年受配母牛数×100%
●以繁殖年度计算。
●中国奶协规定公式中的分子与分母范围为：
—年内二次受胎率按二头计算，三次受胎按三头计算，以此类推……
—配后二个月内出群的母牛不确定妊娠者不统计；配后二个月后出群的母牛一律参加统计。
—以受配后60天的妊娠检查结果，确定受胎头数。
4 、年分娩率
●年分娩按生产水平分别要求：
上年生产水平（kg）分娩率（%）
≤6500 83
6501-7200 81
7201-7800 80
＞7800 78
●计算年分娩率的公式为：
年实际分娩母牛头数/年应分娩母牛头数×100%
—年实际分娩母牛头数为：年内＞270天分娩母牛头数减去年内移入并分娩的母牛头数，加上出售牛中年内能分娩的母牛头数；加上足月死胎母牛数。
—年应分娩母牛头数位：年初18月龄级以上母牛头数加上年初未满18月龄提前配种并在年内分娩的母牛头数。
●中国牛协规定年繁殖率的计算公式与年分娩率一样，但其计算范围有以下差别：
—妊娠七个月以上中断妊娠的计入公式分子。
—年内出群的母牛，凡产犊后出群的，一律参加统计；凡未产犊出群的，一律不参加统计。
—为参加中国奶协活动，各奶牛场的繁殖统计中，可增加年繁殖率的统计内容。
5 、不正产（≤270天）率为≤8%。
后记：
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